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　　病毒的強(qiáng)傳染性與微小粒徑對(duì)濾網(wǎng)的過濾精度、完整性提出嚴(yán)苛要求，通過專業(yè)空氣過濾網(wǎng)病毒過濾效率檢測(cè)可量化評(píng)估濾網(wǎng)對(duì)病毒氣溶膠的攔截效率、阻力變化及密封性能，不僅能為企業(yè)產(chǎn)品研發(fā)、質(zhì)量管控提供科學(xué)數(shù)據(jù)支撐，確保產(chǎn)品符合醫(yī)療、潔凈室等特殊場(chǎng)景的合規(guī)要求，還能幫助運(yùn)維人員及時(shí)發(fā)現(xiàn)濾網(wǎng)破損、效率衰減等問題，避免因?yàn)V網(wǎng)失效導(dǎo)致空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)成為病毒傳播載體，保障系統(tǒng)穩(wěn)定運(yùn)行與環(huán)境安全。

　　病毒過濾效率是指在規(guī)定測(cè)試條件下，空氣過濾網(wǎng)對(duì)特定病毒株（如流感病毒H1N1、冠狀病毒SARS-CoV-2假病毒、腺病毒）的攔截能力，以“過濾后病毒滴度與過濾前病毒滴度的差值占原始滴度的百分比”表示，需同時(shí)滿足“氣溶膠載體攔截”和“病毒本身捕獲”雙重要求。

　　空氣過濾網(wǎng)病毒過濾效率檢測(cè)評(píng)估流程

　　1：樣品準(zhǔn)備與預(yù)處理

　　樣品裁剪：選取3個(gè)代表性濾網(wǎng)樣品，裁剪為100mm×100mm標(biāo)準(zhǔn)尺寸，確保無(wú)破損、無(wú)變形，邊緣用密封膠處理；

　　無(wú)菌處理：將樣品放入無(wú)菌包裝袋，經(jīng)γ射線滅菌或環(huán)氧乙烷滅菌，去除樣品本身附著的微生物，避免干擾檢測(cè)結(jié)果；

　　樣品平衡：將無(wú)菌樣品置于檢測(cè)環(huán)境中平衡24小時(shí)，確保樣品狀態(tài)與測(cè)試環(huán)境一致。

　　2：病毒株選擇與制備

　　病毒株選型：根據(jù)檢測(cè)需求選取代表性病毒（優(yōu)先選擇包膜病毒，如H1N1流感病毒ATCCVR-1469、SARS-CoV-2假病毒（避免活病毒風(fēng)險(xiǎn)）、呼吸道合胞病毒RSV）；

　　病毒培養(yǎng)：在生物安全柜內(nèi)，將病毒接種至對(duì)應(yīng)宿主細(xì)胞（如MDCK細(xì)胞用于H1N1、Vero細(xì)胞用于冠狀病毒），置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48-72小時(shí)，獲得病毒原液；

　　病毒滴度校準(zhǔn)：采用空斑形成單位（PFU）法或TCID??法，將病毒原液稀釋至測(cè)試濃度（10?-10?PFU/mL），確保濃度穩(wěn)定。

　　3：空白對(duì)照與陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置

　　空白對(duì)照：不放入濾網(wǎng)樣品，僅通入不含病毒的氣溶膠載體，按后續(xù)流程采樣培養(yǎng)，確認(rèn)檢測(cè)系統(tǒng)無(wú)微生物污染；

　　陽(yáng)性對(duì)照：不放入濾網(wǎng)樣品，通入制備好的病毒氣溶膠，采樣后培養(yǎng)，確認(rèn)病毒活性正常。

　　4：樣品安裝與病毒氣溶膠通入

　　樣品安裝：將預(yù)處理后的濾網(wǎng)樣品固定于風(fēng)洞測(cè)試段，四周用無(wú)菌密封墊壓實(shí)，確保無(wú)漏風(fēng)；

　　病毒氣溶膠發(fā)生：?jiǎn)?dòng)氣溶膠噴霧器，將病毒懸液（10?PFU/mL）以10mL/min的速率霧化，持續(xù)通入風(fēng)洞，同時(shí)開啟風(fēng)機(jī)，保持風(fēng)速0.5m/s，讓病毒氣溶膠與濾網(wǎng)充分接觸。

　　5：上下游病毒采樣

　　采樣時(shí)機(jī)：病毒氣溶膠通入10分鐘后開始采樣，確保氣流與病毒分布穩(wěn)定；

　　采樣操作：上游、下游采樣器同時(shí)啟動(dòng)，采樣流量設(shè)定為28.3L/min，采樣時(shí)間30分鐘；

　　采樣后處理：采樣結(jié)束后，用5mL無(wú)菌生理鹽水沖洗采樣器收集瓶，獲得病毒洗脫液，立即密封并置于冰盒中保存。

　　6：病毒滴度檢測(cè)

　　梯度稀釋：將上下游病毒洗脫液分別進(jìn)行10倍梯度稀釋（10?1至10??），每個(gè)稀釋度設(shè)置3個(gè)重復(fù)樣；

　　細(xì)胞接種：將稀釋后的病毒液分別接種至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，對(duì)應(yīng)的宿主細(xì)胞懸液每孔100μL，輕輕搖勻；

　　培養(yǎng)孵育：將培養(yǎng)板置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中孵育72小時(shí)，觀察細(xì)胞病變（CPE）情況；

　　滴度計(jì)算：采用Reed-Muench法計(jì)算病毒滴度（PFU/mL），取3個(gè)重復(fù)樣的平均值作為上下游病毒滴度（N?=下游滴度，N?=上游滴度）。

　　7：病毒過濾效率計(jì)算

　　按以下公式計(jì)算VFE：

　　VFE（%）=（1-N?/N?）×100%

　　示例：上游病毒滴度N?=5.2×10?PFU/mL，下游病毒滴度N?=2.1×103PFU/mL，則VFE=（1-2.1×103/5.2×10?）×100%≈99.59%；

　　結(jié)果要求：每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)3次，取平均值作為最終VFE，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）需≤5%。

　　8：結(jié)果驗(yàn)證

　　對(duì)照驗(yàn)證：空白對(duì)照需無(wú)細(xì)胞病變（CPE陰性），陽(yáng)性對(duì)照病毒滴度需≥10?PFU/mL，否則檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，需重新測(cè)試。