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醫(yī)用清洗劑酶活力檢測(cè)方法有哪些
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  • 2026-01-12

　　醫(yī)用清洗劑酶活力是指清洗劑中添加的α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等酶類(lèi)成分，在特定溫度、pH等條件下催化對(duì)應(yīng)污垢（淀粉類(lèi)、蛋白質(zhì)類(lèi)、油脂類(lèi)）水解的能力，其強(qiáng)弱直接反映酶的催化效率與活性水平，通常以單位體積或質(zhì)量清洗劑在規(guī)定條件下分解底物的量來(lái)量化。作為清洗劑去污效能的核心評(píng)價(jià)指標(biāo)，醫(yī)用清洗劑酶活力檢測(cè)能精準(zhǔn)判斷產(chǎn)品配方中酶的實(shí)際活性是否達(dá)標(biāo)，避免因酶活力不足導(dǎo)致醫(yī)療器械表面頑固污垢殘留，進(jìn)而降低交叉感染風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)為生產(chǎn)企業(yè)優(yōu)化配方、質(zhì)量管控提供數(shù)據(jù)支撐，也為醫(yī)療機(jī)構(gòu)選擇合格清洗產(chǎn)品、保障醫(yī)療安全筑牢技術(shù)屏障。


醫(yī)用清洗劑酶活力檢測(cè)


　　醫(yī)用清洗劑酶活力檢測(cè)方法


　?。?）α-淀粉酶活力檢測(cè)（碘-淀粉比色法）


　　定義：1mL液體酶在60℃、pH=6.0條件下，1h液化1g可溶性淀粉，即為1個(gè)酶活力單位，以U/g（U/mL）表示。


　　原理：α-淀粉酶切斷淀粉的α-1,4葡萄糖苷鍵，使淀粉遇碘的藍(lán)紫色逐漸消失呈紅棕色，通過(guò)固定反應(yīng)后的吸光度計(jì)算酶活力。


　　關(guān)鍵步驟


　　配制稀碘液、20g/L可溶性淀粉溶液、pH6.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液等。


　　酶液稀釋后與緩沖液、淀粉溶液混合，60℃水浴反應(yīng)，用稀碘液終止反應(yīng)。


　　在660nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算酶活力。


　　（2）蛋白酶活力檢測(cè)（福林-酚法/偶氮酪蛋白法）


　　定義：在40℃條件下，每分鐘水解酪素產(chǎn)生1μg酪氨酸所需的酶量，規(guī)定為1個(gè)酶活力單位，以U/g（U/mL）表示。標(biāo)準(zhǔn)將原方法的3個(gè)濃度點(diǎn)校準(zhǔn)改為5個(gè)以提升線性與準(zhǔn)確性。


　　原理：蛋白酶水解酪素生成含酚羥基的氨基酸，該氨基酸與福林試劑反應(yīng)生成藍(lán)色物質(zhì)，吸光度與酶活力成正比。


　　關(guān)鍵步驟


　　配制0.5mol/L三氯乙酸、福林試劑、pH7.5磷酸緩沖液、10g/L酪素溶液等。


　　酶液與酪素溶液40℃水浴反應(yīng)，加三氯乙酸終止反應(yīng)，離心取上清液。


　　上清液加碳酸鈉溶液和福林試劑，40℃顯色20min，在680nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算活力。


　?。?）脂肪酶活力檢測(cè)（滴定法）


　　定義：1mL酶液在40℃、pH=7.5條件下，每分鐘催化水解底物產(chǎn)生1μmol脂肪酸所需的酶量，為1個(gè)酶活力單位，以U/g（U/mL）表示。


　　原理：脂肪酶水解甘油三酯生成脂肪酸，用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定脂肪酸，根據(jù)消耗的NaOH量計(jì)算酶活力。


　　關(guān)鍵步驟


　　配制聚乙烯醇（PVA）乳化液、pH7.5磷酸緩沖液、0.05mol/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液等。


　　酶液與PVA乳化液40℃水浴反應(yīng)，加95%乙醇終止反應(yīng)。


　　用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)，記錄消耗體積，計(jì)算酶活力。


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