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　　在公共衛(wèi)生防護(hù)、食品加工、醫(yī)療衛(wèi)生、農(nóng)產(chǎn)品養(yǎng)殖加工等多個(gè)領(lǐng)域，消毒劑的病毒殺滅效果直接關(guān)系到防疫安全、生產(chǎn)合規(guī)與環(huán)境健康，而消毒劑病毒殺滅試驗(yàn)是驗(yàn)證消毒劑殺菌效力、判定產(chǎn)品是否符合國家標(biāo)準(zhǔn)的核心檢測手段。該試驗(yàn)操作具有較強(qiáng)的專業(yè)性和規(guī)范性，從試驗(yàn)準(zhǔn)備到結(jié)果判定，每一個(gè)環(huán)節(jié)的操作偏差都可能影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，進(jìn)而導(dǎo)致檢測結(jié)果失真。

　　消毒劑病毒殺滅試驗(yàn)前期準(zhǔn)備

　　前期準(zhǔn)備是消毒劑病毒殺滅試驗(yàn)順利開展的前提，核心包含試驗(yàn)材料籌備、試驗(yàn)環(huán)境調(diào)試、人員操作規(guī)范三大模塊，所有準(zhǔn)備工作需嚴(yán)格遵循《消毒技術(shù)規(guī)范》及對應(yīng)產(chǎn)品的國家標(biāo)準(zhǔn)要求，確保試驗(yàn)條件的統(tǒng)一性和規(guī)范性。

　　1)試驗(yàn)材料的甄選與校核

　　試驗(yàn)材料分為核心檢測材料和輔助耗材，核心材料需滿足標(biāo)準(zhǔn)菌株/病毒株、待檢消毒劑、中和劑三大核心要素，且均需在有效期內(nèi)使用。病毒株需選擇國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的指示病毒（如脊髓灰質(zhì)炎病毒、諾如病毒、新冠病毒等，依檢測需求選定），由具備資質(zhì)的微生物菌種保藏機(jī)構(gòu)提供；待檢消毒劑需留存樣品原包裝，核對成分、濃度、生產(chǎn)日期等信息，按試驗(yàn)要求進(jìn)行梯度稀釋；中和劑是關(guān)鍵材料，需能快速中和消毒劑的殺菌作用，且對試驗(yàn)病毒無抑制、無毒性，提前通過中和劑鑒定試驗(yàn)驗(yàn)證其有效性。輔助耗材如無菌試管、培養(yǎng)皿、移液管等，需經(jīng)高溫高壓滅菌處理，確保無菌無雜質(zhì)。

　　2)試驗(yàn)環(huán)境的標(biāo)準(zhǔn)化調(diào)試

　　消毒劑病毒殺滅試驗(yàn)對環(huán)境溫濕度、無菌條件要求嚴(yán)苛，常規(guī)試驗(yàn)需在生物安全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)開展，實(shí)驗(yàn)室等級依病毒株的生物安全級別判定。試驗(yàn)環(huán)境溫度控制在20℃±2℃，相對濕度50%±10%，全程保持無菌操作環(huán)境，超凈工作臺(tái)提前30分鐘開啟紫外消毒，試驗(yàn)前用75%乙醇對操作臺(tái)面、器具進(jìn)行二次消毒；同時(shí)需提前調(diào)試培養(yǎng)箱、離心機(jī)、生物安全柜等儀器設(shè)備，確保設(shè)備運(yùn)行參數(shù)精準(zhǔn)，且經(jīng)計(jì)量校準(zhǔn)合格。

　　3)試驗(yàn)人員的操作規(guī)范要求

　　參與試驗(yàn)的人員需具備相應(yīng)的微生物檢測資質(zhì)，熟悉病毒操作安全規(guī)范，全程穿戴無菌防護(hù)服、手套、口罩、護(hù)目鏡等防護(hù)用品；試驗(yàn)前需進(jìn)行手部消毒，避免人為因素引入污染；同時(shí)需提前熟悉試驗(yàn)流程，明確各環(huán)節(jié)操作分工，避免因操作失誤導(dǎo)致試驗(yàn)中斷或數(shù)據(jù)偏差。

　　消毒劑病毒殺滅試驗(yàn)核心操作流程

　　消毒劑病毒殺滅效果試驗(yàn)的核心流程遵循病毒懸液制備→消毒劑作用→中和終止→培養(yǎng)檢測→結(jié)果計(jì)算的邏輯展開，不同類型消毒劑（如含氯消毒劑、過氧化物類消毒劑、季銨鹽類消毒劑）的操作細(xì)節(jié)略有差異，但核心步驟保持一致，以下為通用標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，也是試驗(yàn)的核心關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

　　（1）病毒懸液的制備與濃度標(biāo)定

　　病毒懸液的濃度直接影響試驗(yàn)結(jié)果，需嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法制備，確保病毒滴度符合試驗(yàn)要求。

　　取標(biāo)準(zhǔn)病毒株，按培養(yǎng)要求接種至敏感細(xì)胞株中，在適宜溫濕度下培養(yǎng)至出現(xiàn)典型細(xì)胞病變；

　　收集培養(yǎng)物，經(jīng)反復(fù)凍融、離心處理后，取上清液即為病毒原液；

　　采用終點(diǎn)稀釋法對病毒原液進(jìn)行滴度標(biāo)定，確定病毒原液的TCID??值，再用無菌稀釋液將病毒原液稀釋至試驗(yàn)所需濃度，制備成病毒懸液，現(xiàn)配現(xiàn)用，避免病毒失活。

　?。?）消毒劑與病毒的混合作用：

　　該環(huán)節(jié)是驗(yàn)證消毒劑殺滅效果的核心，關(guān)鍵在于精準(zhǔn)控制消毒劑濃度、作用時(shí)間、作用溫度三大參數(shù)，嚴(yán)格遵循試驗(yàn)方案，杜絕人為調(diào)整參數(shù)。

　　按試驗(yàn)要求，將稀釋后的待檢消毒劑溶液加入無菌試管中，置于恒溫水浴鍋中預(yù)熱至試驗(yàn)溫度（20℃±2℃）；

　　取等體積的病毒懸液與消毒劑溶液快速混合，立即計(jì)時(shí)，輕輕搖勻，確保二者充分接觸，混合過程在無菌條件下進(jìn)行；

　　嚴(yán)格按照試驗(yàn)設(shè)定的作用時(shí)間（如1min、5min、10min、30min，依消毒劑類型和產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)選定）進(jìn)行培養(yǎng)，到達(dá)預(yù)設(shè)時(shí)間后，立即進(jìn)行下一步中和操作，不得延長或縮短作用時(shí)間。

　?。?）中和劑終止消毒劑作用：

　　中和操作的核心是快速終止消毒劑的殺菌作用，避免消毒劑持續(xù)作用導(dǎo)致病毒進(jìn)一步滅活，從而保證檢測結(jié)果能真實(shí)反映消毒劑在設(shè)定作用時(shí)間內(nèi)的殺滅效果。

　　取消毒劑與病毒的混合液，按預(yù)設(shè)比例加入中和劑，快速搖勻，置于試驗(yàn)溫度下反應(yīng)10min，確保中和劑與消毒劑充分反應(yīng)，完全消除其殺菌活性；

　　同時(shí)設(shè)置中和劑對照，驗(yàn)證中和劑對病毒無毒性、無抑制作用，確保中和環(huán)節(jié)無干擾，若中和劑對照出現(xiàn)病毒抑制，需重新更換中和劑并開展鑒定試驗(yàn)。

　?。?）樣品接種與培養(yǎng)檢測：

　　中和反應(yīng)完成后，對樣品進(jìn)行接種培養(yǎng)，通過觀察細(xì)胞病變情況，判定病毒的存活情況，該環(huán)節(jié)需嚴(yán)格遵循無菌操作，避免樣品污染。

　　取中和后的樣品，進(jìn)行梯度稀釋，將不同稀釋度的樣品分別接種至已長成單層的敏感細(xì)胞培養(yǎng)板中，每個(gè)稀釋度設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置病毒對照（僅加病毒懸液，不加消毒劑）、細(xì)胞對照（僅加細(xì)胞培養(yǎng)液，不加病毒和消毒劑）；

　　將接種后的培養(yǎng)板置于37℃±1℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞病變情況，連續(xù)觀察7天，記錄各稀釋度培養(yǎng)板的細(xì)胞病變結(jié)果。

　?。?）試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算與判定：

　　結(jié)果計(jì)算與判定是試驗(yàn)的最終環(huán)節(jié)，需嚴(yán)格按照《消毒技術(shù)規(guī)范》中的公式進(jìn)行計(jì)算，結(jié)合國家標(biāo)準(zhǔn)要求判定消毒劑的病毒殺滅效果，確保結(jié)果客觀、準(zhǔn)確、可追溯。

　　根據(jù)細(xì)胞病變結(jié)果，計(jì)算各試驗(yàn)組的病毒滴度，通過與病毒對照組的病毒滴度對比，計(jì)算消毒劑的病毒殺滅對數(shù)值；

　　判定標(biāo)準(zhǔn)：若消毒劑在設(shè)定作用時(shí)間內(nèi)，病毒殺滅對數(shù)值≥4.00，即為符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，判定該消毒劑對目標(biāo)病毒具有殺滅效果；若殺滅對數(shù)值＜4.00，則判定試驗(yàn)不合格，需分析原因并重新開展試驗(yàn)。

　　中科檢測是專業(yè)的病毒滅活效果驗(yàn)證機(jī)構(gòu)，開展消毒劑病毒殺滅試驗(yàn)服務(wù)，具備CMA、CNAS資質(zhì)認(rèn)證，檢測病毒范圍包括流感病毒、手足口病毒、腸道病毒、冠狀病毒、噬菌體病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、狂犬病毒、腺病毒等等。