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2025-12-22
寵物食品的微生物污染是威脅寵物健康的重要隱患，其中沙門氏菌與霉菌是兩類高頻檢出的有害微生物。沙門氏菌可引發(fā)寵物嘔吐、腹瀉甚至敗血癥，還可能通過接觸傳播給人類；霉菌及其代謝產(chǎn)生的黃曲霉毒素等，會對寵物的肝臟、腎臟造成不可逆損傷。寵物食品微生物檢測有哪些方法？
寵物食品微生物檢測技術(shù)
?。?）寵物食品沙門氏菌檢測方法
沙門氏菌是革蘭氏陰性桿菌，廣泛存在于肉類、蛋類原料中，是寵物食品中重點管控的致病菌。傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法需經(jīng)過增菌、分離、生化鑒定等步驟，耗時3-5天，而快速檢測技術(shù)可將檢測周期縮短至幾小時甚至幾十分鐘。
1.免疫層析法（膠體金法）
技術(shù)原理：利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，將沙門氏菌特異性抗體固定在檢測試紙條的檢測線和質(zhì)控線上，當(dāng)樣品中存在沙門氏菌抗原時，會與膠體金標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物并在檢測線處顯色，實現(xiàn)定性檢測。
操作流程：
取寵物食品樣品（如干糧、濕糧），按照比例加入增菌液，進(jìn)行短時間增菌培養(yǎng)（一般4-6小時，目的是提高沙門氏菌濃度，避免假陰性）；
取增菌后的培養(yǎng)液，滴加到檢測試紙條的樣品孔中；
等待10-15分鐘，觀察試紙條顯色結(jié)果：若檢測線和質(zhì)控線均顯色，為陽性；僅質(zhì)控線顯色，為陰性；質(zhì)控線不顯色，檢測無效。
優(yōu)勢與應(yīng)用場景：操作簡單，無需專業(yè)儀器，適合現(xiàn)場快速篩查，如寵物食品生產(chǎn)車間的在線檢測、寵物店及養(yǎng)寵家庭的初步檢測。缺點是靈敏度相對較低，對于低濃度污染樣品可能漏檢，需結(jié)合其他方法驗證。
2.酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）
技術(shù)原理：將沙門氏菌抗體包被在酶標(biāo)板孔內(nèi)，加入樣品后，樣品中的沙門氏菌抗原與包被抗體結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的二抗，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)二抗”復(fù)合物，最后加入底物，通過酶催化底物顯色，根據(jù)吸光度值判斷是否存在沙門氏菌。
操作流程：
樣品增菌與前處理：同免疫層析法，需先進(jìn)行增菌培養(yǎng)；
加樣與孵育：將處理后的樣品加入酶標(biāo)板孔，孵育后洗去未結(jié)合的雜質(zhì)；
加酶標(biāo)二抗：孵育后再次洗滌，去除未結(jié)合的酶標(biāo)二抗；
顯色與讀數(shù)：加入底物顯色，用酶標(biāo)儀讀取吸光度值，與臨界值對比判斷結(jié)果。
優(yōu)勢與應(yīng)用場景：靈敏度高于免疫層析法，可實現(xiàn)批量檢測，適合寵物食品生產(chǎn)企業(yè)的實驗室檢測。缺點是操作步驟較多，耗時較長（一般2-4小時）。
?。?）寵物食品霉菌檢測方法
霉菌是絲狀真菌的統(tǒng)稱，寵物食品中常見的霉菌有曲霉屬、青霉屬、鐮刀菌屬等，其中曲霉屬中的黃曲霉、寄生曲霉等會產(chǎn)生黃曲霉毒素B1，具有強致癌性。
1.快速檢測培養(yǎng)基法
技術(shù)原理：在傳統(tǒng)培養(yǎng)基中加入特定的指示劑或抑制劑，抑制雜菌生長，同時使霉菌菌落呈現(xiàn)特定顏色，便于快速識別和計數(shù)。
操作流程：
樣品稀釋：取寵物食品樣品，用無菌生理鹽水進(jìn)行梯度稀釋；
涂布接種：將稀釋后的樣品均勻涂布在快速檢測培養(yǎng)基平板上；
培養(yǎng)與觀察：將平板置于25-28℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24-48小時（傳統(tǒng)霉菌培養(yǎng)需5-7天），觀察菌落形態(tài)和顏色，計數(shù)霉菌數(shù)量。
優(yōu)勢與應(yīng)用場景：操作簡單，成本低，可同時實現(xiàn)霉菌的分離和計數(shù)，適合寵物食品生產(chǎn)企業(yè)的常規(guī)檢測。缺點是需要一定的培養(yǎng)時間，且對檢測人員的菌落識別能力要求較高。
2.熒光染色法
技術(shù)原理：利用熒光染料與霉菌細(xì)胞壁或細(xì)胞核的特異性結(jié)合，使霉菌在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)明亮的熒光，從而快速識別。常用的熒光染料有鈣熒光白，它可與霉菌細(xì)胞壁中的幾丁質(zhì)結(jié)合，在紫外線照射下發(fā)出藍(lán)色熒光。
操作流程：
樣品前處理：取寵物食品樣品，經(jīng)均質(zhì)、過濾后，取濾液或直接取固體樣品涂片；
熒光染色：在涂片上滴加鈣熒光白染液，染色1-2分鐘后，用蒸餾水沖洗；
熒光顯微鏡觀察：將涂片置于熒光顯微鏡下，調(diào)節(jié)激發(fā)光波長，觀察是否存在發(fā)出藍(lán)色熒光的霉菌菌絲或孢子。
優(yōu)勢與應(yīng)用場景：檢測速度快，可在30分鐘內(nèi)完成，適合現(xiàn)場快速篩查，如原料驗收時的快速檢測。缺點是只能定性檢測，無法準(zhǔn)確計數(shù)，且需要熒光顯微鏡等設(shè)備。
檢驗檢測認(rèn)證服務(wù)機構(gòu)。
整體技術(shù)解決方案。
