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　　黃曲霉毒素是黃曲霉、寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的強(qiáng)毒性代謝產(chǎn)物，其中黃曲霉毒素B?毒性最強(qiáng)，兼具強(qiáng)致癌性、肝毒性和免疫抑制作用，對(duì)寵物健康危害極大。寵物食品黃曲霉毒素檢測(cè)非常關(guān)鍵。寵物（尤其是貓，作為專(zhuān)性食肉動(dòng)物）的肝臟代謝能力遠(yuǎn)弱于人類(lèi)，長(zhǎng)期攝入含微量黃曲霉毒素的食品，會(huì)引發(fā)慢性肝損傷，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致肝硬化、肝癌；短期攝入超標(biāo)食品，可能出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、黃疸等急性中毒癥狀，甚至死亡。

　　寵物食品黃曲霉毒素檢測(cè)限值

　　我國(guó)寵物食品黃曲霉毒素檢測(cè)以黃曲霉毒素B?為主要判定指標(biāo)，總黃曲霉毒素（B?+B?+G?+G?）為輔助評(píng)估指標(biāo)，具體限值依據(jù)《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB13078）和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《寵物飼料衛(wèi)生規(guī)定》，如下：

　　黃曲霉毒素B?（強(qiáng)制限值）：

　　全價(jià)貓糧、犬糧：≤10μg/kg（干基）

　　寵物添加劑預(yù)混合飼料：≤10μg/kg

　　寵物零食：≤10μg/kg

　　超出該限值即判定為不合格產(chǎn)品，禁止流通。

　　寵物食品黃曲霉毒素檢測(cè)方法

　　1.酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

　　適用場(chǎng)景：生產(chǎn)線現(xiàn)場(chǎng)質(zhì)控、原料快速檢測(cè)，15~30分鐘出結(jié)果，適合大批量樣品初篩。

　　檢測(cè)流程：

　?、贅悠非疤幚恚悍Q(chēng)取5g寵物食品樣品（粉碎至均勻粉末），加入25mL甲醇-水溶液（體積比7:3），震蕩提取30分鐘，過(guò)濾后取上清液，用磷酸鹽緩沖液稀釋至合適濃度。

　　②加樣反應(yīng)：將稀釋后的樣品提取液、黃曲霉毒素B?標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別加入包被有抗體的ELISA板孔中，再加入酶標(biāo)二抗，37℃孵育30分鐘，使抗原與抗體特異性結(jié)合。

　?、巯礈炫c顯色：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液清洗5次，去除未結(jié)合的雜質(zhì)；加入顯色劑，37℃孵育15分鐘，結(jié)合的酶標(biāo)二抗會(huì)催化顯色劑變色。

　?、芙K止與讀數(shù)：加入終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中黃曲霉毒素B?的含量。判定：若檢測(cè)結(jié)果≤10μg/kg，可判定為初篩合格；若超出限值，需用IAC-HPLC法復(fù)檢確認(rèn)。

　　2.免疫親和柱凈化-高效液相色譜法（IAC-HPLC）

　　適用場(chǎng)景：實(shí)驗(yàn)室精準(zhǔn)檢測(cè)、仲裁檢測(cè)，檢出限可達(dá)0.1μg/kg，結(jié)果具有法律效力。

　　檢測(cè)流程：

　?、贅悠诽崛。悍Q(chēng)取25g粉碎后的寵物食品樣品，加入125mL甲醇-水溶液（7:3），高速勻漿2分鐘，過(guò)濾后取10mL濾液，用90mL純水稀釋?zhuān)玫较♂屘崛∫骸?/p>

　?、诿庖哂H和柱凈化：將稀釋提取液通過(guò)黃曲霉毒素免疫親和柱，柱內(nèi)抗體與黃曲霉毒素特異性結(jié)合，用10mL純水洗滌柱體，去除雜質(zhì)；再用5mL甲醇洗脫結(jié)合的黃曲霉毒素，收集洗脫液。

　　③濃縮定容：將洗脫液用氮?dú)獯蹈?，加?mL甲醇-乙腈水溶液（體積比1:1）溶解殘?jiān)?，過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，得到待檢測(cè)液。

　?、芨咝б合嗌V檢測(cè)：

　　色譜條件：C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水（體積比2:2:6），流速1.0mL/min，柱溫30℃，熒光檢測(cè)器（激發(fā)波長(zhǎng)365nm，發(fā)射波長(zhǎng)450nm）。

　　進(jìn)樣檢測(cè)：取20μL待檢測(cè)液注入色譜儀，記錄色譜峰保留時(shí)間和峰面積，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中黃曲霉毒素B?及總黃曲霉毒素的含量。

　　判定：若黃曲霉毒素B?含量≤10μg/kg，判定為合格；超出則為不合格。